Osomatsu-kun opowiada pełne humoru losy sześciorga identycznych, niezwykle psotnych braci Matsuno, z których najstarszym jest właśnie tytułowy Osomatsu. Akcja tej komediowej serii rozgrywa się w typowym japońskim miasteczku, gdzie bracia codziennie wplątują się w szereg absurdalnych sytuacji z powodu swoich żartów i wybryków. Ich beztroskie życie często komplikuje się w obliczu rywalizacji o względy sympatycznej dziewczyny Totoko oraz konfliktów z irytującym, ale zabawnym Iyami. Ton anime pozostaje lekki, pełen slapstickowego humoru i zabawnych dialogów, przedstawiając widzom uroczą atmosferę japońskiej codzienności w latach 60. ubiegłego wieku.
